محلول پروپیدیوم یوداید (PI) (0.5 میلی گرم بر میلی لیتر)
250.000 تومان – 760.000 تومان
مقدار: 1 میلی لیتر / 2میلی لیتر / 5میلی لیتر
غلظت: 0.5 میلی گرم بر میلی لیتر
کاربردها: سنجش چرخه سلول، آپوپتوز، نکروز، بررسی سیکل سلول با استفاده از روش فلوسیتومتری، رنگ آمیزی هسته سلولها
متداول ترین روش برای ارزیابی چرخه سلولی استفاده از فلوسیتومتری برای اندازه گیری محتوای DNA سلولی است. در طی این فرآیند، یک رنگ فلورسنت مانند PI که به DNA متصل می شود با یک سوسپانسیون تک سلولی از سلول های نفوذپذیر (permeabilized) یا تثبیت شده (fixed) انکوبه می شود.
آنالیز چرخه سلولی یکی از کاربردهای پیشگام فلوسیتومتری است. فلوسیتومتری علاوه بر شناسایی جمعیت سلولی در مراحل مختلف چرخه سلولی، مانند G0/G1، S و G2/M، شناسایی سلول های آپوپتوزی (sub G0) را نیز ممکن می سازد.
پس از رنگ آمیزی با رنگ انترکاله شونده PI، از آنجایی که رنگ به صورت استوکیومتری به DNA متصل می شود، مقدار سیگنال فلورسنت ساطع شده با مقدار DNA نسبت مستقیم دارد. به دلیل تغییراتی که در طول چرخه سلولی رخ می دهد، تجزیه و تحلیل محتوای DNA امکان تمایز بین فازهای G1، S، G2 و M را فراهم می کند.
خلاصه روش کار از قرار زیر است:
- سلول ها برداشت شده و با PBS شستشو داده می شوند.
- تثبیت و نفوذپذیر شدن سلول ها با محلول پارافرمالدهید حاوی 0.1% تریتون X100 یا NP40 انجام می شود.
- سپس سلول ها به مدت 1 ساعت در دمای اتاق انکوبه می شوند.
- سپس با سرعت 800g به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ می شوند.
- رسوب سلولی در بافر PBS شسته می شوند.
- با استفاده از RNAse A اطمینان حاصل می کنیم که RNA سلولی حذف شده و رنگ فقط به DNA وصل می شود.
- رنگ PI را اضافه می کنیم.
- با آنالیز FS به SS سلول های تکی را بررسی انتخاب کرده و با آنالیز نمودار تعداد سلول به رنگ PI درصد سلول ها در هر مرحله از چرخه سلولی را تحیلی می کنیم.
پروپیدیوم یوداید (propidium iodide; PI) یک رنگدانه فلورسانت است که بیشترین جذب را در 493 نانومتر و بیشترین نشر فلورسانت را در 636 نانومتر دارد. این ماده پس از اتصال به DNA دچار شیفت کوانتومی شده و اوج جذب آن به 493 (نور سبز) و اوج نشر فلورسانت آن به 617 نانومتر (نور نارنجی/قرمز) تغییر پیدا می کند. با توجه به این ویژگی ها به عنوان یک رنگ رایج در بررسی محتوای DNA سلول استفاده می شود.
PI یک آنالوگ ساختاری اتیدیوم بروماید است که مانند آن دارای یک ساختار حلقوی حاوی نیتروژن است. این مولکول دارای یک آمین چهارم اضافه است که به صورت یونی به مولکول های ید متصل می شود. از رنگدانه های انترکاله شونده است که به DNA متصل می شود. از این رنگ در رنگ آمیزی هسته های سلولی استفاده می شود و از آنجایی که یک ترکیب هیدروفیل است نفوذپذیری غشایی ضعیفی دارد و برداشت آن توسط سلول های با غشای آسیب دیده (سلول های مرده) به طور قابل توجهی بالا است و به همین دلیل برای بررسی زیست پذیری سلول مورد استفاده قرار می گیرد. در روش های مبتنی بر میکروسکوپی فلورسنت و یا فلو سیتومتری با استفاده از این رنگدانه، سلول های زنده که نفوذپذیری کمی دارند این رنگ را به خود نمی گیرند در حالی که این رنگ به سرعت از غشای آسیب دیده سلول های مرده (آپوپتوتیک یا نکروتیک) وارد آن ها شده و پس از اتصال به DNA پس از تهییج به وسیله منبع نور سبز از خود نور فلورسانت در دامنه زرد/قرمز ساطع می کند که باعث تمایز سلول های مرده و زنده می شود.
کاربردهای مختلف این رنگدانه شامل بررسی زیست پذیری سلول، بررسی سیکل سلولی، و بررسی آپوپتوز (مرگ برنامه ریزی شده سلولی) می باشد.
اولین کسی باشید که دیدگاهی می نویسد “محلول پروپیدیوم یوداید (PI) (0.5 میلی گرم بر میلی لیتر)”
محصولات مرتبط
آنتی بادی
کیت الایزا
آنتی بادی
آنتی بادی
آنالیز پروتئین
کیت الایزا
آنتی بادی
کیت الایزا
نقد و بررسی‌ها
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.